血清标本可按常规方法采集，应留意避免溶血，红细胞溶解时会开释出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特 异性显色。如在冰箱中保留过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。本文将叙述板式ELISA各个操纵步骤的留意要点，珠式、管式及磁 性球ELSIA，国外试剂均与特殊仪器配合应用，严格遵照划定操纵，必能得出正确的结果。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部， 并留意不可溅出，不可产气愤泡。有此测定(如间接法ELISA)需用稀的血清，可在试管中按划定的稀释度稀释后再加样。
ELISA的操纵因固相载体的形成不同而有所差异，海内医学检修一般均用板式点。除特殊情况外，在医学检修中均以血清作为检测标本。加酶结合物应用液和底 物用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。每次加标本应更换吸嘴，以发生交叉污 染，也可用一次性的定量塑料管加样。优质的试剂，良好的仪器和准确的操纵是保证ELISA试剂盒检测结果正确可靠的必要条件。ELISA顶用的蒸馏 水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。有些标本可直接进行测定(如血清 、尿液)，有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。
在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡，可上下倒置 混和，不要在混匀器上强烈振荡。制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清天然凝固、血块收缩后即可取得。也可在板孔中加入稀释液，再在其加入血 清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。可用作ELISA测定的标 本十分广泛，体液(如血清 )、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体 或抗原成份，ELISA试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保留。